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核酸提取试技术的发展之路
发布时间:2019-05-06 点击次数:11次
      自1869年核酸被首次发现以来,许多研究者在核酸的提取方法上进行了不懈的探索,对核酸的各种材料和试剂进行了改进,十二烷基磺酸钠、酚、脲和胍盐等各种试剂纷纷被应用到核酸提取实验中,各种用于核酸提取的商品化试剂盒也应运而生。其中,临床FFPE核酸提取试剂盒传统的提取方法主要有:酚抽提法、碱裂解法、CTAB抽提法和EtBr-CsCl梯度离心法。这些传统提取方法可从不同组织样本中分离出DNA和RNA,但这些技术中包含沉淀和离心等操作步骤,其所需的生物样本量较大,且提取的步骤较为繁杂、费时费力,得率也不高,难以实现自动化操作,另外,大部分的传统方法中还需要用到有毒化学试剂,对操作人员的健康具有潜在危害,因此,伴随着分子生物学以及高分子材料学的发展,从液相系统中分离核酸的传统技术逐渐被以固相载体为基础的新方法所取代。
  以固相吸附物载体为基础的新型核酸提取方法主要有:旋转离心柱提取法、玻璃珠吸附法、二氧化硅基质法、阴离子交换法和纳米磁珠提取法。这类方法的操作步骤主要可分为三个部分:(1)利用裂解液促使细胞破裂,使核酸释放于液相中,(2)利用载体对核酸的较强亲和力和吸附力,将释放出来的核酸特异性地结合在特定载体上,使蛋白质、多糖和脂类等其它杂质依然游离于液相中,随上清的移走而被除去,(3)通过调节洗脱液的离子强度和pH值,将吸附于载体上的核酸洗脱下来而得到纯化后的核酸。
  其中,离心柱法DNA提取试剂盒以其低廉的价格和相对便捷的操作,在市面上应用得较为广泛,但随着对DNA提取需求量的增多,离心柱法提取DNA的缺点也日益凸显。样本需求量大,损失多,对于珍稀样本无能为力等成为离心柱法无法避免的缺点,同时离心柱法DNA提取过程需要反复离心,不便于高通量、自动化操作,与现代生物学实验要求格格不入。为了适应现代分子生物学高通量,高灵敏度,自动化操作的发展需求,20世纪90年代,磁珠法DNA提取技术由此诞生,其原理是磁珠表面带有特定的活性基团,在特定条件下能够与核酸进行特异性可逆结合,同时利用磁珠自身具备的磁响应能力,在外加磁场的作用下可方便地进行定向移动与富集,进而实现对核酸的分离纯化。


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