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来了解一下细胞因子的生物学测定法
点击次数:264 发布时间:2019-04-26
      根据细胞因子特定的生物学活性,应用相应的指示系统,如各种依赖性细胞株或靶细胞,同时与标准品对比测定,从而得知样品中细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/mL)表示。生物学活性检测法所用的靶细胞可直接从组织中分离,如骨髓细胞的集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验,或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为靶细胞。其测定方法可分为促进细胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性测定法、集落形成法、趋化作用测定法及细胞因子诱导产物测定法等。
  促进细胞增殖和增殖抑制法:目前已建立的应用依赖细胞株检测各种细胞因子的方法,其操作过程基本相同。检测细胞因子促生长活性或抑制生长活性是将不同稀释度的待测样品或细胞因子标准品与培养的细胞株共同培养一定时间,然后检测增殖的细胞数。前者的增殖细胞数与细胞因子的含量成正比,而后者的增殖细胞数与细胞因子的含量成反比。常用的检测细胞增殖的方法有3H-TdR掺人法、比色法、染色法和直接计数法等。其中测定细胞代谢酶活性反映细胞增殖数量的比色法包括MTY、XTF、MTS和NAG等方法,可在酶标仪上自动化检测,且不接触核素,较为常用。此外,测定代谢产物荧光强度的方法也可检测增殖细胞数,如ATP法和cAMP法。细胞因子还能诱导靶细胞表达某些表面分子或分泌一些蛋白质,可以用荧光素标记抗体检测表达相应分子的细胞数,或用特定方法测定细胞分泌的蛋白质,间接了解细胞因子的活性。
  各种集落刺激因子(CSF)作用于造血系统的不同细胞,可促进其增殖及在半固体琼脂凝胶系统中克隆培养骨髓细胞的集落形成,故可采用集落形成试验研究CSF的水平。

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